检测肠胃内的甲卡西酮物质
来源: 毒品检验网   发布时间: 2020-02-14 01:17   28 次浏览   大小:  16px  14px  12px
检测毒品通过尿液、血液和毛发比较常见,但是通过检测胃部内的物质比较少见。通过先关技术,对家兔进行试验,检测其胃部内的甲卡西酮物质,这是一项毒品检测技术的进步。
胃内容物
甲卡西酮,化学名称为2-(甲基氨基)-1-苯基-1-丙酮,英文名称:methcathinone,是人工合成的一种苯丙胺类兴奋剂。滥用甲卡西酮可导致幻听、幻视等精神病症状,严重者甚至出现如啃食人脸等攻击性行为,故甲卡西酮又有“食人盐”、“丧尸剂”、“丧尸药”等名称。甲卡西酮的滥用已成为较严重的问题,其已被列入属国家管制的第一类精神药品。卡西酮(cathinone)作为甲卡西酮的主要代谢物,也是一种苯丙胺类兴奋剂,两者的化学结构见图1。
化学结构式
国内外对甲卡西酮的检验方法研究主要有气相色谱-质谱(GC-MS)、液相色谱(LC)、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)等,主要研究的是非生物检材和血液、尿液和唾液、毛发等生物样品,未见有研究胃内容物中甲卡西酮的报道。本研究建立了胃内容物中甲卡西酮的LC-MS/MS检测方法,该方法操作简便、检测灵敏度较高,可应用于胃内容物中甲卡西酮及代谢物卡西酮的测定,方法可靠。

甲卡西酮、卡西酮标准储备液;双苯戊二氨酯(SKF525A)(纯度95%),甲醇、甲酸、氯化钠,乙腈。实验用水均为重蒸馏水。Agilent1290/6470AUPLC-MS/MS液-质联用仪;XH-C旋涡混合器;HY-3调速多样振动器;L-535-R离心机。

取体重为(2.0±0.2)千克的家兔4只,雌雄不限,分为两组,第一组3只,分别编号为T301、T302、T303,第二组1只(空白对照),编号为T300。第一组家兔按体重10毫克每千克灌胃10毫克每毫升的甲卡西酮氯化钠溶液,第二组家兔按体重10毫克每千克灌胃同等剂量的氯化钠溶液。给药后2小时将中毒家兔处死,采集其胃内容物,放置在-18摄氏度的冰箱中保存待检。1.2.2检材处理准确称取胃内容物1克于10毫升塑料离心试管中,加入含SKF525A内标50纳克每毫升的乙腈液3毫升,涡旋混匀5分钟,振荡提取30分钟,4000转每分钟离心20分钟(离心半径分钟),分离上清液,用0.22微米微孔有机滤膜过滤于1.5毫升样品瓶中,供LC-MS/MS分析,采用内标法-标准曲线法定量。1.2.3LC-MS/MS仪器条件液相柱:ColumnEclipsePlusC18色谱柱(1.8微米,10毫米乘3毫米);柱温:45摄氏度;流速:0.3毫升每分钟;进样量:1微升;流动相:A相为0.1%甲酸水溶液,B相为乙腈有机相,梯度洗脱程序见表1。
洗脱程序表
离子源:电喷雾离子源,正离子模式(ESI+);离子源温度:350摄氏度;离子喷雾电压:3.5KV检测方式:多反应监测模式(MRM);每个化合物分别选择两对母离子/子离子对作为定性离子对,其定性离子对、定量离子对、碰撞能量(CE)和保留时间见表2。
定性离子表
色谱分离
图2和图3分别为空白胃内容物添加100纳克每克的甲卡西酮、卡西酮,图4为添加150纳克每克内标物SKF525A,按照“1.2.2”方法处理检材,再按照“1.2.3”分析得到甲卡西酮、卡西酮、SKF525AMRM色谱图;图5、图6分别为中毒家兔T303胃内容物按照按照“1.2.2”方法处理检材,再按照“1.2.3”项下条件分析得到甲卡西酮、卡西酮MRM色谱图。
MRM色谱图
出限、定量限
检出限:色谱峰高相当于基线噪音3倍的浓度确定为检出限,检测所得胃内容物中卡西酮检出限为1.0纳克每克,甲卡西酮检出限为0.5纳克每克。
AMRM色谱图
定量限:检测目标的色谱峰高相当于基线噪音10倍的浓度确定为定量限,检测所得胃内容物中卡西酮定量限为2.0纳克每克,甲卡西酮定量限为1.0纳克每克。

按"2.2"项下方法分别取含甲卡西酮、卡西酮20,200,2000纳克每克的低中、高三个浓度的待检胃内容物样品1克,将胃内容物样品按"1.2.2"项下方法进行提取、进样分析。另分别取2.0纳克每毫升、20纳克每毫升、200纳克每毫升甲卡西酮、卡西酮标准工作液10微升,吹干,用3毫升含SKF525A内标50纳克每毫升乙腈液溶解,取1微升进行LC-MS/MS分析。由经提取与未经提取分析所得色谱图中甲卡西酮、卡西酮与SKF525A的色谱峰面积比计算甲卡西酮、卡西酮的回收率及精密度。每个浓度3个样品重复测定3次,计算日内精密度;每个浓度3个样品连续3天内,每天重复测定3次,计算日间精密度。具体结果见表3。
胃内容物检材回收率
甲卡西酮合成简单,在50-60摄氏度的温和反应条件下,利用重铬酸钠、高锰酸钾、次氯酸钠等氧化剂对麻黄碱进行氧化即得。该物质于20世纪20年代由J.F.Hyde等进行了首次合成,在前苏联曾将其作为抗抑郁药物进行使用,20世纪60年代开始将其用于娱乐,到20世纪80年代开始出现甲卡西酮滥用现象。21世纪初,甲卡西酮在中东地区出现快速蔓延的迹象,并迅速进入欧洲市场。从2008年至2012年,由于禁毒条例制定的滞后性,甲卡西酮及其类似物成为合法的具有兴奋作用的物质之一,在整个欧洲地区尤其英国风靡一时,出现大量的滥用案例。鉴于问题的严重性,以色列、瑞典、英国等国家相继将甲卡西酮这一类物质列为非法物质制。
胃内容物检材表
随着中外交流的不断深入,甲卡西酮也已进入国内并出现滥用现象,且具有非常明显的地域聚集性。根据国家食品药品监督管理总局(CFDA)2016年度的国家药物滥用监测报告显示,2016年我国境内甲卡西酮滥用例数有707例,为2015年246例的2.9倍。其中,有693例甲卡西酮滥用者出现在山西,占总滥用人数的98.0%。近期出现甲卡西酮从山西往其他省份扩散蔓延的不少案例,打击甲卡西酮滥用形势不容乐观。

更有研究表明甲基苯丙胺、甲卡西酮等苯丙胺类毒品有可能取代海洛因、可卡因等传统毒品而成为21世纪流行范围最广、危害程度最大的毒品。甲卡西酮具有一定的精神依赖性,多次摄入极易成瘾。滥用甲卡西酮会对滥用者造成一系列的副作用,严重的甚至会造成滥用者死亡。甲卡西酮滥用者通常经口服、静脉注射、鼻吸、直肠给药等途径摄入甲卡西酮,而现有研究多集中在甲卡西酮滥用者的血液、尿液和唾液、毛发等,对甲卡西酮滥用者胃内容物相关研究甚少,尤其是口服甲卡西酮的滥用死亡者,研究其胃内容物中甲卡西酮含量有着重要的意义。

由于甲卡西酮、卡西酮均为碱性化合物,故选择正离子模式(ESI+)。为了保证较短的保留时间和峰形较好,故采用梯度洗脱模式。流动相选用0.1%的甲酸溶液。有机相通过筛选甲醇和乙腈,发现乙腈的洗脱能力与峰形均好于甲醇,故选择乙腈为有机相。已报道的尿液中甲卡西酮GC-MS检测方法检测限为0.01纳克每毫升,线性范围0.02-2.00微克每毫升;已报道的非生物检材中甲卡西酮LC-MS/MS检测方法,检出限为0.04纳克每毫升,线性范围0.1-10000纳克每毫升。

而本文报道LC-MS/MS检测胃内容物中的甲卡西酮检验方法,线性范围为1-5000纳克每克,检出限为0.5纳克每克,定量限为1.0纳克每克;卡西酮的检验方法线性范围为2-5000纳克每克,检出限为1.0纳克每克,定量限为2.0纳克每克。与报道相比,本方法检材为生物检材胃内容物,应用范围更能针对实际工作;与已报道的GC-MS检测方法相比,本方法前处理简单,检出限更低,线性范围更宽。经试验可知,所建立的胃内容物中甲卡西酮及其代谢物卡西酮的LC-MS/MS定性定量分析方法,操作简便,检测灵敏度较高,可用于实际甲卡西酮中毒案件中胃内容物中甲卡西酮及其代谢物卡西酮的检验。(文转自现代生物医学进展2019)

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